പിസിആർ പ്രതികരണങ്ങളിൽ ഇടപെടൽ ഘടകങ്ങൾ

പിസിആർ പ്രതികരണ സമയത്ത്, ചില ഇടപെടൽ ഘടകങ്ങൾ പലപ്പോഴും നേരിടുന്നു.
പിസിആറിന്റെ ഉയർന്ന സംവേദനക്ഷമത കാരണം, മലിനീകരണം പിസിആർ ഫലങ്ങളെ ബാധിക്കുന്ന ഏറ്റവും പ്രധാനപ്പെട്ട ഘടകങ്ങളിലൊന്നായി കണക്കാക്കപ്പെടുന്നു, മാത്രമല്ല തെറ്റായ പോസിറ്റീവ് ഫലങ്ങൾ സൃഷ്ടിക്കുകയും ചെയ്യും.
തെറ്റായ നെഗറ്റീവ് ഫലങ്ങളിലേക്ക് നയിക്കുന്ന വിവിധ ഉറവിടങ്ങളാണ് തുല്യമായ വിമർശനാത്മകമായി. പിസിആർ മിശ്രിതത്തിന്റെ അല്ലെങ്കിൽ അതിലും കൂടുതൽ അവശ്യ ഭാഗങ്ങൾ അല്ലെങ്കിൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രതികരണം തന്നെ തടസ്സപ്പെടുത്തുകയോ തടസ്സപ്പെടുത്തുകയോ ചെയ്താൽ, ഡയഗ്നോസ്റ്റിക് അസെ തടസ്സപ്പെടുത്താം. ഇത് കാര്യക്ഷമത കുറയ്ക്കുന്നതിനും തെറ്റായ നെഗറ്റീവ് ഫലങ്ങൾ വരെ നയിക്കും.
ഗോർജിബിപ്പിനു പുറമേ, ടാർഗെറ്റ് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സമഗ്രത ഒഴിവാക്കുന്നത് ഷിപ്പിംഗ് കൂടാതെ / അല്ലെങ്കിൽ സംഭരണ ​​വ്യവസ്ഥകൾ തയ്യാറാക്കുന്നതിന് മുമ്പായി ഉണ്ടാകാം. പ്രത്യേകിച്ചും, ഉയർന്ന താപനില അല്ലെങ്കിൽ അപര്യാപ്തമായ സംഭരണം സെല്ലുകളുടെയും ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകളുടെയും നാശം സംഭവിക്കാം. സെല്ലും ടിഷ്യു ഫിക്സേഷനും പാരഫിൻ ഉൾച്ചേർക്കലും ഡിഎൻഎ വിഘടനത്തിനും സ്ഥിരമായ ഒരു പ്രശ്നത്തിനും അറിയപ്പെടുന്ന കാരണങ്ങളല്ല (ചിത്രം 1, 2 കാണുക). ഈ സന്ദർഭങ്ങളിൽ, ഒപ്റ്റിമൽ ഒറ്റപ്പെടലും ശുദ്ധീകരണവും പോലും സഹായിക്കില്ല.

ചിത്രം 1 | ഡിഎൻഎ സമഗ്രതയുടെ അസ്ഥിരീകരണത്തിന്റെ ഫലം
യാന്ത്രിക വിഭാഗങ്ങളുടെ പാരഫിൻ വിഭാഗങ്ങളിൽ നിന്ന് വേർതിരിച്ചെടുത്ത ഡിഎൻഎയുടെ ഗുണനിലവാരം കാര്യമായവസക്തമാണെന്ന് അഗരോസ് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് കാണിച്ചു. ഫിക്സേഷൻ രീതിയെ ആശ്രയിച്ച് വ്യത്യസ്ത ശരാശരി ശകലത്തിന്റെ ദൈർഘ്യത്തിന്റെ ഡിഎൻഎ നിലവിലുണ്ടായിരുന്നു. നേറ്റീവ് ഫ്രോസൺ സാമ്പിളുകളിൽ ഉറപ്പിക്കുമ്പോൾ മാത്രമേ ഡിഎൻആ സംരക്ഷിച്ചിട്ടുള്ളൂ. ശക്തമായി അസിഡിറ്റിക് ബ ou യി എൻ ഫിക്സേറ്റീവ് അല്ലെങ്കിൽ തടസ്സമില്ലാത്ത, ഫോർമിക് ആസിഡ്-അടങ്ങിയ ഫോർമാലിൻ ഡിഎൻഎയുടെ ഗണ്യമായ നഷ്ടം സംഭവിച്ചു. ശേഷിക്കുന്ന ഭാഗം വളരെ വിഘടിതമാണ്.
ഇടതുവശത്ത്, ശകലങ്ങൾ കിലോബേസ് ജോഡികളായി (കെബിപി) പ്രകടിപ്പിക്കുന്നു

ചിത്രം 2 | ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ടാർഗറ്റുകളുടെ സമഗ്രത നഷ്ടപ്പെടുന്നു
(എ) രണ്ട് സ്ട്രോണ്ടുകളിലും 3'-5 'വിടവ് ടാർഗെറ്റ് ഡിഎൻഎയിൽ ഒരു ഇടവേളയ്ക്ക് കാരണമാകും. ചെറിയ ശകലത്തിൽ ഡിഎൻഎയുടെ സമന്വയം ഇപ്പോഴും സംഭവിക്കും. എന്നിരുന്നാലും, ഒരു പ്രൈമർ പനനൈലിംഗ് സൈറ്റ് ഡിഎൻഎ ശകലത്തിൽ കാണുന്നില്ലെങ്കിൽ, രേഖീയ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ മാത്രമേ സംഭവിക്കൂ. ഏറ്റവും അനുകൂലമായ കേസിൽ, ശകലങ്ങൾ പരസ്പരം പുനരാരംഭിച്ചേക്കാം, പക്ഷേ വിളവ് ചെറുതും താഴെയുള്ളതുമായ അളവ് കുറവായിരിക്കും.
. നീളമേറിയ ചൂടുള്ള ഘട്ടത്തിൽ, പ്രൈമറുകൾ മാട്രിക്സ് ഡിഎൻഎയിൽ നിന്ന് ഉരുകിപ്പോകും, ​​കൂടാതെ കർശന സാഹചര്യങ്ങളിൽ പോലും റദ്ദാക്കില്ല.
(സി) അടുത്തുള്ള തൈമൈൻ ബേസ് ഒരു ടിടി ഡിഎംആർ രൂപീകരിക്കുന്നു.
മോളിക്യുലാർ ഡയഗ്നോസ്റ്റിക്സിൽ പലപ്പോഴും സംഭവിക്കുന്ന മറ്റൊരു പൊതു പ്രശ്നം, ഫെനോൾ-ക്ലോറോഫോം വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിനെ അപേക്ഷിച്ച് ടാർഗെറ്റ് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകളുടെ ഒപ്റ്റിമൽ റിലീസ് ആണ്. അങ്ങേയറ്റത്തെ സന്ദർഭങ്ങളിൽ, ഇത് തെറ്റായ നിർദേശങ്ങളുമായി ബന്ധപ്പെടുത്താം. സെൽ അവശിഷ്ടങ്ങളുടെ ലിസിസ് അല്ലെങ്കിൽ എൻസൈമാറ്റിക് ദഹനം എന്നിവ തിളപ്പിച്ച് കൂടുതൽ സമയം ലാഭിക്കാൻ കഴിയും, പക്ഷേ ഈ രീതി പലപ്പോഴും ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് റിലീസ് അപര്യാപ്തമായതിനാൽ കുറഞ്ഞ പിസിആർ സംവേദനക്ഷമതയ്ക്ക് കാരണമാകും.

ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സമയത്ത് പോളിമറേസ് പ്രവർത്തനത്തിന്റെ തടസ്സം

പൊതുവേ, സുഗോപ്റ്റിമൽ പിസിആർ ഫലങ്ങളിലേക്ക് നയിക്കുന്ന എല്ലാ ഘടകങ്ങളും വിവരിക്കുന്നതിന് തടസ്സം ഒരു കണ്ടെയ്നർ ആശയമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു. കർശനമായി ബയോകെമിക്കൽ സെൻസ്, അതിരുകടന്നത് എൻസൈമിന്റെ പ്രവർത്തനത്തിൽ പരിമിതപ്പെടുത്തിയിരിക്കുന്നു, അതായത്, ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് അല്ലെങ്കിൽ അതിന്റെ കോഫാക്ടർ സൈറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് ഇത് ഇടപെടൽ വഴി കുറയ്ക്കുകയോ തടയുകയോ ചെയ്യുന്നു).
പുനർവിചിന്തനം അടങ്ങിയ സാമ്പിൾ അല്ലെങ്കിൽ വിവിധ ബഫറുകളിലെയും എക്സ്ട്രാക്റ്റുകളിലെയും ഘടകങ്ങൾ അതിന്റെ കോഫറ്റേഴ്സ് (ഇജി ഇറ്റാക്കി) നേരിട്ട് തടയാൻ കഴിയും, അതുവഴി പോളിമറയേസും കുറഞ്ഞ നെഗറ്റീവ് പിസിആർ ഫലങ്ങളും നേതൃത്വം നൽകുന്നു.
എന്നിരുന്നാലും, പ്രതികരണ ഘടകങ്ങളും ടാർഗെറ്റ് അടങ്ങിയ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകളും തമ്മിലുള്ള നിരവധി ഇടപെടലുകൾ 'പിസിആർ ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ' ആയി കണക്കാക്കുന്നു. ഒറ്റപ്പെടലിന്റെ സമഗ്രതയെ തടസ്സപ്പെടുത്തുകയും ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് പുറത്തിറങ്ങുകയും ചെയ്യുക, ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് പുറത്തിറക്കി, സാമ്പിൾ, ചുറ്റുമുള്ള പരിഹാരവും ഖര ഘട്ടവും തമ്മിലുള്ള ഇടപെടലുകൾ സംഭവിക്കാം. ഉദാഹരണത്തിന്, 'സ്കെവേഞ്ചറുകൾക്ക് സിംഗിൾ-അല്ലെങ്കിൽ ഇരട്ട-സ്ട്രെയിറ്റ് ഡിഎൻഎയ്ക്ക് ബന്ധിപ്പിച്ച്, ഒടുവിൽ പിസിആർ പ്രതികരണ പാത്രത്തിൽ എത്തുന്ന ടാർഗെറ്റുകളുടെ എണ്ണം കുറച്ചുകൊണ്ട് ഒറ്റപ്പെടലിനും ഇരട്ട-ഒറ്റത്തവണ ഡിഎൻഎയ്ക്ക് ഇടപെടാനും ഇടപെടാനും കഴിയും.
പൊതുവേ, പിസിആർ ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ മിക്ക ശരീര ദ്രാവകങ്ങളിലും ക്ലിനിക്കൽ ഡയഗ്നോസ്റ്റിക് ടെസ്റ്റുകൾക്കും ഉപയോഗിക്കുന്ന റീജനേഴ്സുകളും (യൂറിനിയ, ഹീമോഗ്ലോബിൻ, ഹെപ്പാരിൻ എന്നിവ), പരിസ്ഥിതിയിലെ ഹീമോഗ്ലോബിൻ, ഹെപാറൻ, പരിസ്ഥിതിയിലെ ഘടകങ്ങൾ (ഓർഗാനിക് ഘടകങ്ങൾ, ഗ്ലൈക്കോണന്റുകൾ, ഗ്ലൈക്കോജൻ, ഗ്ലൈക്കോജൻ, കൊഴുപ്പ്), പരിസ്ഥിതിയിലെ ഘടകങ്ങൾ (ഫിനോളുകൾ, ഹെവി ലോഹങ്ങൾ)

ബാക്ടീരിയ, യൂക്കറിയോട്ടിക് സെല്ലുകൾ, ടാർഗെറ്റ് ഇതര ഡിഎൻഎ, ടിഎൻഎ-ബൈൻഡിംഗ് മാക്രോമോൾക്കറ്റുകൾ, ടിഷ്യു സ്ട്രോമോൾക്കറ്റുകൾ, ഗ്ലോവ്സ്, പ്ലാസ്റ്റിക് എന്നിവ പോലുള്ള ലബോറട്ടറി ഉപകരണങ്ങൾ. എക്സ്ട്രാക്റ്റേഷൻ സമയത്ത് അല്ലെങ്കിൽ പിസിആർ ഇൻഹിബിറ്ററുകളെ നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനുള്ള ഏറ്റവും ഇഷ്ടാനുസൃത മാർഗ്ഗമാണ് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകൾ ശുദ്ധീകരണം.
ഇന്ന്, വിവിധ ഓട്ടോമേറ്റഡ് എക്സ്ട്രാക്ഷൻ ഉപകരണങ്ങൾ നിരവധി മാനുവൽ പ്രോട്ടോക്കോളുകളെ മാറ്റിസ്ഥാപിക്കാൻ കഴിയും, പക്ഷേ 100% വീണ്ടെടുക്കൽ കൂടാതെ / ടാർഗെറ്റുകളുടെ / അല്ലെങ്കിൽ ടാർഗെറ്റുകളുടെ ശുദ്ധീകരണം ഒരിക്കലും നേടിയിട്ടില്ല. സാധ്യതയുള്ള ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകളിൽ സാധ്യതയുള്ള സാധ്യതയുള്ള ആസിഡുകളിൽ ഇപ്പോഴും ഉണ്ടായിരിക്കാം അല്ലെങ്കിൽ ഇതിനകം പ്രാബല്യത്തിൽ വന്നേക്കാം. ഇൻഹിബിറ്ററുകളുടെ സ്വാധീനം കുറയ്ക്കുന്നതിന് വ്യത്യസ്ത തന്ത്രങ്ങൾ നിലവിലുണ്ട്. ഉചിതമായ പോളിമറയസിന്റെ തിരഞ്ഞെടുപ്പിന് ഇൻഹിബിറ്റർ പ്രവർത്തനത്തെ കാര്യമായ സ്വാധീനം ചെലുത്തും. പിസിആർ തടസ്സം കുറയ്ക്കുന്നതിനുള്ള മറ്റ് മാർഗ്ഗങ്ങൾ പോളിമറൈസ് ഏകാഗ്രത വർദ്ധിപ്പിക്കുകയോ ബിഎസ്എ പോലുള്ള അഡിറ്റീവുകൾ പ്രയോഗിക്കുകയോ ചെയ്യുന്നു.
ആന്തരിക പ്രോസസ് ക്വാളിറ്റി കൺട്രോൾ (ഐപിസി) ഉപയോഗിക്കുന്നതിലൂടെ പിസിആർ പ്രതികരണങ്ങൾ തടയാൻ കഴിയും.
എത്തനോൾ, എട്റ്റ, സെവാബ്, എൽഐസി, ജിയുസിഎൻ, സെറ്റാബ്, ഇസ്സോപ്രോപാനോൾ, ഐസോപ്രോപനോൾ, ഫിനോൾ തുടങ്ങിയ എല്ലാ പ്രതിരോധങ്ങളും മറ്റ് പരിഹാരങ്ങളും നീക്കംചെയ്യാൻ ശ്രദ്ധിക്കണം. അവരുടെ ഏകാഗ്രതയെ ആശ്രയിച്ച്, അവ pccr സജീവമാക്കുകയോ തടയുകയോ ചെയ്യാം.